巨細胞病毒IgM(room temperature) (CMV-IgM)
?
意大利進口TORCH試劑
測IgM為較受推崇的抗體捕獲法,測IgG為6點定標的定量間接法,總準確率可達到98~100%
不同品種操作完全一致,已稀釋樣本可多項檢測
?
巨細胞病毒Ig M抗體(CMV-IgM)
酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)試劑盒
捕獲法
用途
CMV--IgM酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)試劑盒用于體外定性檢測人血清中的巨細胞病毒IgM抗體。供體外診斷使用。高度復(fù)雜的檢測。
1.?????? 引言
在世界上大多數(shù)地區(qū),無癥狀的巨細胞病毒(CMV)感染通常發(fā)生于兒童期。然而,在經(jīng)濟富裕的地區(qū),CMV初次感染的時期會被推遲,從而導(dǎo)致:
-????????? 妊娠期感染,可導(dǎo)致新生兒明顯或遲發(fā)的先天性異常;
-????????? 輸血之后感染,可導(dǎo)致CMV誘發(fā)的單核細胞增多癥;
-????????? 器官移植后因免疫抑制而發(fā)生感染,可導(dǎo)致恢復(fù)期并發(fā)癥的發(fā)生和/或器官喪失。
如果沒有實驗室檢查的支持,如病毒分離、IgM特異性抗體陽性或IgG特異性抗體水平顯著升高,臨床上不能診斷CMV感染。
1904年,Rippert描述了一種含有巨大包涵體的細胞,即CMV對細胞產(chǎn)生的主要解剖病理學(xué)作用(1,2)。這種皰疹病毒于50年之后首先被Smith分離出來,但“巨細胞病毒”的名稱卻是由Weller命名(3)。CMV可長期潛伏于人類宿主的若干種腺體和腎臟中,成為一種潛在的感染因素。與其他皰疹病毒不同的是,CMV生長緩慢,在細胞培養(yǎng)中產(chǎn)生遲發(fā)性的細胞病性作用。CMV感染的特征是形成含有巨大核周包涵體的腫脹細胞,即巨細胞。
基于血清陽性個體占總體人群比例(40-100%)的發(fā)病率研究顯示,CMV感染的發(fā)生與人群的社會經(jīng)濟條件成反比。年齡相關(guān)性發(fā)病率研究提示,在人的一生中圍產(chǎn)期和生殖期發(fā)生CMV感染的危險性增高(4)。圍產(chǎn)期感染可通過宮頸分泌物和母乳來傳播,而在性成熟期血清轉(zhuǎn)化的突然升高則提示性病傳播的可能性。
雖然產(chǎn)前CMV感染的發(fā)生頻率較低,但它可通過胎盤由母親傳遞給胎兒,并成為新生兒精神發(fā)育遲緩和其他先天性缺陷的主要感染性原因。2000名嬰兒中只有1名會出現(xiàn)嚴重的巨細胞包涵體?。–ID),而獲得宮內(nèi)無癥狀性感染的卻有10倍之多。醫(yī)學(xué)上,無癥狀性或“休止的”先天性感染不容忽視,因為它可能對長期發(fā)展產(chǎn)生影響,而又缺乏可指導(dǎo)臨床醫(yī)生做出診斷的明顯臨床表現(xiàn)(5)。
另外,還會發(fā)生兩種類型的醫(yī)源性CMV感染。第一種,免疫抑制治療之后經(jīng)常發(fā)生的感染復(fù)發(fā)或再燃,典型的伴隨疾病為器官移植(6)或癌癥治療(7)。第二種,接受多次輸血的患者通常會發(fā)生初次或再燃感染(8)。這些機會性感染多數(shù)是亞臨床的,但疾病的嚴重程度取決于接受免疫抑制藥的劑量和個體的免疫狀態(tài)及能力。此外,CMV感染常見于獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的患者。已有資料提示CMV可能與AIDS的病因?qū)W有關(guān)(9)??傮w來說,在免疫受損者中初次和復(fù)發(fā)性CMV感染的發(fā)病率和死亡率均有所升高(10)。
在CMV初次感染中,抗體的產(chǎn)生與其他病毒感染的模式一樣,即CMV IgM抗體一過性升高,而后CMV IgG抗體水平升高并可持續(xù)。感染再燃患者的CMV IgM抗體并不一定會再次出現(xiàn),似乎取決于研究的患者群體(11)。由于母體的IgM不會通過胎盤屏障,因此新生兒血清中出現(xiàn)CMV特異性IgM抗體高度提示先天性或新生兒感染的可能性。
正如Engvall和Perlman(12,13,14)以及 Van Weeman(15)首次描述的那樣,酶免疫測定法可靈敏、特異地檢測和測量血清中的蛋白質(zhì)。酶聯(lián)免疫測定法的靈敏度、特異性和重復(fù)性均可與其他檢測抗體的血清學(xué)方法如免疫熒光(IFA)、補體結(jié)合、血細胞凝集和放射免疫測定相媲美(16,17,18,19)。近來,酶免疫測定法被發(fā)展用于巨細胞病毒抗體的檢測,結(jié)果顯示是有用的(18)。
檢測原理
ELISA依賴于生物學(xué)物質(zhì)(如抗原)吸附在塑料表面如聚苯乙烯(固相)上的能力。當與固相載體結(jié)合的抗原與患者血清接觸時,如果血清中存在特異性抗體,該抗體則會與抗原結(jié)合在固相載體上,形成抗原-抗體復(fù)合物。通過洗滌去除過多的抗體。之后加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗人IgM球蛋白,后者將會與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。通過洗滌去除過多的酶標記抗體,然后加入顯色劑/底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)。如果患者血清中存在特異性抗體,溶液將會呈藍色。用1N H2SO4終止酶反應(yīng)后,微孔中的溶液變成黃色。不同的顏色反映血清中不同的抗體濃度,用合適的分光光度計或酶標儀進行比色(12,13,14,15)。
?
?
2.?????? 參考文獻
1.?? Rippert, H. 1904. Uerber protozoenartige Zellen in der Niere einces syphilitischen Neugeborenen und in der Parotis von Kindern. Centralb. f. Allg. Pathol. 15:943-948.
2.?? Smith, M.G. 1954. Propagation of Salivary Gland Virus of the Mouse in Tissue Cultures. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 86:435-440.
3.?? Weller, T.H., J.B. Hanshaw, D.E. Scott. 1960. Serologic Differentiation of Viruses Responsible for Cytomegalic Inclusion Disease. Virology. 12:130-132.
4.?? Carlstrom, G. and B. Jalling. 1970. Cytomegalovirus Infections in Different Groups of Paediatric Patients. Act Paediatr. Scand. 59:303-309.
5.?? Melish, M.E. and J.B. Hanshaw. 1973. Congenital Cytomegalovirus Infection: Developmental Progress of Infants Detected by Routine Screening. Am. J. Dis. Child. 126:190-194.
6.?? Ho, M. 1982. Cytomegalovirus: Biology and Infection, NY. Plenum Medical Book Co.
7.?? Bodey, G.P., P.T. Wertlake, G. Douglas, et al. 1965. Cytomegalic Inclusion Disease in Patients with Acute Leukemia. Ann. Intern. Med. 62:899-906.
8.?? Prince, A.M., W. Szmuness, S.J. Millian, et al. 1971. A Serologic Study of Cytomegalovirus Infections Associated with Blood Transfusions. N. Engl. J. Med. 284:1125-1131.
9.?? Fields, B.N. (ed.). 1985. T-Cell Leukemia Viruses. In: Virology. NY. Raven Press. 58:1359.
10. Fields, B.N. (ed.). 1985. Cytomegalovirus. In: Virology. NY, Raven Press 29: 645.
11. Reynolds, D.W., S. Stagno and C.A. Alford. 1979. Laboratory Diagnosis of
?? Cytomegalovirus Infection. Diagnostic Procedures for Viral, Rickettsial and
?? Chlamydia Infections. American Public Health Association. pp. 399 and 23.
12. Engvall, E., K. Jonsson, and P. Perlman. 1971. Enzyme-Linked Immunosorbent
?? Assay, (ELISA) Quantitative Assay of Immunoglobulin G. Immunochemistry.
?? 8:871-874.
13. Engvall, E. and P. Perlman. 1971. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA.
?? In: Protides of the Biological Fluids. H. Peeters, ed. Proceedings of the Nineteenth
?? Colloquium, Brugge Oxford. Pergamon Press. pp 553-556.
14. Engvall, E., K. Jonsson, and P. Perlman. 1971. Enzyme-Linked Immunosorbent
?? Assay. II. Quantitative Assay of Protein Antigen, Immunoglobulin-G, By Means of
?? Enzyme- Labelled Antigen and Antibody-Coated tubes. Biochem. Biophys. Acta.
?? 251: 427-434.
15. Van Weeman, B. K. and A.H.W.M. Schuurs. 1971. Immunoassay Using
?? Antigen-Enzyme Conjugates. FEBS Letter. 15:232-235.
16. Bakerman, S. 1980. Enzyme Immunoassays. Lab. Mgmt. August. pp 21-29.
17. Booth, J.C., G. Hannington, T.A.G. Aziz, et al. 1979. Comparison of enzyme-linked
? ?immunosorbent assay (ELISA) technique and complement-fixation test for
? ?estimation of cytomegalovirus IgG antibody. J. Clin. Pathol. 32:122-127.
??? 18.Cappel, R., F. De Cuyper, and J. De Braekeleer. 1978. Rapid detection of IgG and
????? ?IgM antibodies for cytomegalovirus by the enzyme-linked immunosorbent assay
????? ?(ELISA). Arch. Virol. 58:253-258.
19.Engvall, E. and P. Perlman. 1972. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA.
?? III.Quantitation of Specific Antibodies by Enzyme-Labeled Anti-Immunoglobulins
?? in Antigen-Coated Tubes. J. Immunol. 109: 129-135.
20.?? CDC/NIH Interagency Working Group. 1993. In: Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. 3rd Edition. U.S. Dept. of Health and Human Services, Public Health Service. pp18-24.
21. Stagno, S., et al. 1984. Birth Defects. 20:65-85.
22. Fung J.C., R.C. Tilton. 1985. Ann. Clin. Lab. Sci. 15:204-211.
23. Stagno, S., et al. 1985. J. Clin. Microbiol. 2l:930-935.
24. Drew, W.L. 1983. Diag. Med. 6:61-66.
25. Stagno, S., et al. 1980. Pediatrics. 65:251-257.
26. Reynolds, D.W., S. Stagno, et al. 1973. N. Eng. J. Med. 289:1-5.
27. http://www.cap.org/html/ftpdirectory/checklistftp.html. 1998. Laboratory General -
? ?CAP (College of American Pathology) Checklist (April 1998). pp 28-32.
28. NCCLS. 1997. National Committee for Clinical Laboratory Standard. Preparation
?? and Testing of Reagent Water in the Clinical Laboratory. NCCLS Publication
? ?C3-A3.
29. National Committee for Clinical Laboratory Standards. 1990. Procedures for the
? ?Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture Approved Standard.
? ?NCCLS Publication H18-A.
30. NCCLS. 1991. National Committee for Clinical Laboratory Standard. Internal
? ?Quality Control Testing: Principles & Definition. NCCLS Publication C24- A.
樣本溫育只需45分鐘(在同類產(chǎn)品中時間最短)
全部操作流程只需2~3小時(取決于樣本量),即使開展全部8項檢測亦可在半個工作日內(nèi)輕松完成
底物為單一底物液,簡化操作,減少誤差
稀釋液、洗滌液、底物液、終止液均可通用
試劑及包裝均有顏色標記,減少操作失誤