弓形體IgM(Toxo-IgM)
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意大利進(jìn)口TORCH試劑
測IgM為較受推崇的抗體捕獲法,測IgG為6點(diǎn)定標(biāo)的定量間接法,總準(zhǔn)確率可達(dá)到98~100%
不同品種操作完全一致,已稀釋樣本可多項(xiàng)檢測
樣本溫育只需45分鐘(在同類產(chǎn)品中時(shí)間最短)
全部操作流程只需2~3小時(shí)(取決于樣本量),即使開展全部8項(xiàng)檢測亦可在半個(gè)工作日內(nèi)輕松完成
底物為單一底物液,簡化操作,減少誤差
稀釋液、洗滌液、底物液、終止液均可通用
試劑及包裝均有顏色標(biāo)記,減少操作失誤
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弓形蟲Ig M抗體(Toxo-IgM)
酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)試劑盒
捕獲法
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用途:
??? 弓形蟲抗體Toxo-IgM 酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)試劑盒用于檢測人血清中的鼠弓形體IgM抗體。供體外診斷使用。高度復(fù)雜的檢測。
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1.?????? 引言
鼠弓形體是一種球蟲類寄生蟲,最早在1908年從一種北非的嚙齒類動(dòng)物剛地梳趾鼠(Ctenodactylus ? gondii)的體內(nèi)分離出來。之后,這種生物在多種鳥類、爬行類和哺乳類動(dòng)物體內(nèi)都有發(fā)現(xiàn)(1)。
人類的鼠弓形體感染可有多種感染源:食用了感染的肉類,特別是羊肉和豬肉,或是攝入了家貓和野貓攜帶的含有卵囊的污物,都有導(dǎo)致感染的可能(2)。也已證明該病可通過器官移植、輸血傳播或是靜止期感染重新激活導(dǎo)致發(fā)病。先天性弓形體病有非常復(fù)雜的臨床癥狀,因?yàn)楦鞣N各樣臨床癥狀的存在,在做鑒別診斷的時(shí)候,幾乎要考慮所有嬰兒可能發(fā)生的病癥(3)。
該病的臨床癥狀可以是非特異性的,比如貧血、脾腫大、黃疸、發(fā)熱、肝腫大、淋巴結(jié)腫大和嘔吐等。先天性弓形體病很容易被臨床誤診,尤其是那些癥狀非特異性的患兒(4)。當(dāng)免疫抑制患者有中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害的臨床或?qū)嶒?yàn)室表現(xiàn)時(shí),鑒別診斷時(shí)也必須考慮弓形體?。?)。在世界范圍內(nèi),鼠弓形體是一種常見的潛伏性感染源(6)。
在后天性獲得性弓形體病中,通常在感染的極早期階段就可檢測出IgM抗體,出現(xiàn)臨床癥狀1或2個(gè)月之內(nèi)IgM抗體水平達(dá)到峰值。IgM抗體的典型表現(xiàn)為:它維持可檢測水平的時(shí)間只有幾周(7),卻可以存在長達(dá)2年之久(5)。
由于IgM型抗體不能通過胎盤屏障,所以IgM特異性抗體的檢測在新生兒先天性弓形體病的診斷中起著非常重要的作用(5)。它也有助于近期獲得性(急性)感染和慢性感染之間的鑒別。
酶聯(lián)免疫測定法的靈敏度、特異性和重復(fù)性均可與其他檢測抗體的血清學(xué)方法如免疫熒光、補(bǔ)體結(jié)合、血細(xì)胞凝集和放射免疫測定法相媲美(8,9,10)。
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檢測原理
???? ELISA依賴于生物學(xué)物質(zhì)(如抗原)吸附在塑料表面如聚苯乙烯(固相)上的能力。當(dāng)與固相載體結(jié)合的抗原與患者血清接觸時(shí),如果血清中存在特異性抗體,該抗體則會(huì)與抗原結(jié)合在固相載體上,形成抗原-抗體復(fù)合物。通過洗滌去除過多的抗體。之后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗人IgM球蛋白,后者將會(huì)與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合。通過洗滌去除過多的酶標(biāo)記抗體,然后加入顯色劑/底物四甲基聯(lián)苯胺(TMB)。如果患者血清中存在特異性抗體,溶液將會(huì)呈藍(lán)色。用1N H2SO4終止酶反應(yīng)后,微孔中的溶液變成黃色。不同的顏色反映血清中不同的抗體濃度,用合適的分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀進(jìn)行比色(9,10,11,12,13)。
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血清處理
??? 檢測病毒特異性IgM抗體的固相免疫測定法同樣對(duì)干擾因子敏感。本試劑盒通過在測定之前的血樣處理排除了這種干擾。吸附液的使用減少了可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果的競爭性病毒特異性IgG抗體的濃度。類似地,通過去除IgG、中和類風(fēng)濕因子可使假陽性的可能性降至最低。
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2.?????? 使用的局限性
1)????? 建議使用者仔細(xì)閱讀并充分理解包裝盒內(nèi)的說明書。為獲得可靠的結(jié)果,必須嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。正確移取樣品和試劑、洗滌以及溫育的時(shí)間控制對(duì)于獲得正確的結(jié)果尤其重要。
2)????? 對(duì)免疫抑制患者的ELISA結(jié)果必須慎重解釋。
3)????? 意義不明確的樣品在重新測定后如果仍然不明確,則應(yīng)用另一種替代方法,如免疫熒光測定法(IFA)。如果結(jié)果仍不明確,則應(yīng)重新采樣。
4)????? 檢測不到IgM抗體并不能排除最近或目前的感染。
5)????? 特異性IgG抗體會(huì)與IgM抗體競爭同一位點(diǎn)而導(dǎo)致假陰性。相反,在特異性IgG抗體存在時(shí)類風(fēng)濕因子會(huì)導(dǎo)致假陽性(15,16)。吸附液可減少樣品中的競爭性病毒特異性IgG抗體,并使類風(fēng)濕因子的干擾降至最低。研究顯示,試劑盒吸附液所能去除的IgG最大量為血清中IgG正常高限(1380mg/dL)的超出量。檢測到的RF最高效價(jià)(1:2560;1000 IU/ml)并沒有對(duì)測定結(jié)果造成負(fù)面影響。
6)????? 在一些ELISA檢測中,某些抗核抗體會(huì)導(dǎo)致假陽性反應(yīng)。
7)????? 強(qiáng)烈建議同時(shí)檢測新生兒及其母親的血樣。只有當(dāng)排除了母體IgM抗體通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)的情況,新生兒血清中出現(xiàn)IgM抗體才能考慮為先天性感染。另外,如果嬰兒的確是先天性感染,IgM抗體(與IgG抗體)水平會(huì)持續(xù)或升高;然而如果抗體來自母體,抗體水平的下降會(huì)與其半衰期相一致。
8)????? 本品的檢測結(jié)果應(yīng)由臨床醫(yī)生結(jié)合其他臨床表現(xiàn)和診斷方法來解釋。
9)????? 本試劑盒并不是為了檢測患者的免疫狀態(tài),而是用于檢測某人對(duì)弓形體的抗體反應(yīng),從而提示弓形體活動(dòng)性感染。
3.?????? 參考文獻(xiàn)
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